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    腺病毒ADV

    腺病毒ADV

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    腺病毒(Adenovirus, ADV)是一种无包膜的线性双链DNA病毒,具有普遍的细胞和组织熏染能力。熏染历程强烈,适于短时间内举行基因高表达的实验,与其它病毒相比,腺病毒优势在于插入片断较长,表达活性强。

      体外应用时,腺病毒载体转基因效率高(靠近100%的转导效率),且可转导差异类型的细胞,对于大量难转染细胞的基因递送是一个很好的工具。可是,在体内应用时,由于腺病毒免疫原性强,熏染强烈,故常会引起动物局部组织炎症反映和机体免疫反映,对动物体征和实验效果的客观性造成影响。

    ADV包装和侵染历程

    腺病毒包装与纯化

      腺病毒包装骨架达质粒与穿梭质粒共转染HEK-293细胞,待细胞泛起CPE状态后通过网络细胞上清和细胞裂解物,通过浓缩或氯化铯密度梯度离心纯化病毒。 
      CPE(Cytopathic Effect):病毒对组织作育细胞侵染后发生的细胞变性,使用此种病变效应可举行病毒定量。
     

    腺病毒滴度检测

      检测要领:酶联免疫法腺病毒滴度测定,凭证盘算熏染后染成褐色的阳性细胞数,来盘算病毒滴度。
           实验原理:腺病毒熏染的阳性细胞表达的衣壳卵白被染成褐色。
           检测要领:免疫显色要领
           实验原理:通过抗5型腺病毒外壳卵白的单抗与待熏染腺病毒样品的细胞团结,再用HRP标志的二抗与一抗团结,经显色液显色,被熏染的细胞酿成褐色,凭证阳性细胞数,来盘算病毒滴度。

    腺病毒载体优势

           ① 表达快,腺病毒熏染细胞后,1-2天即可表达
           ② 载体容量大,熏染效率高,常用于熏染难熏染的细胞
           ③ 不整合到染色体中,无插入致突变性
           ④  具有嗜肝性,易于熏染肝细胞,腺病毒的体内应用是用于熏染肝脏
        不外由于腺病毒免疫原性高,对某些对外源刺激敏感的动物模子和组织中易造成炎症,体内应用需审慎。

    差异病毒的生物学特衴uan冉

    载体选择
      MRCAT猫先生体育生物拥有富厚的腺病毒产物,用于操作编码基因和非编码基因,如lncRNA、microRNA、circRNA。
           以下腺病毒载体可供您选择:
    调控方式 载体编号 载体名称(载体元件顺序) 真核抗性 荧光 启动子 默认标签 载体容量
    过表达 H225 pADV-mCMV-MCS-3xFLAG N/A N/A mCMV 3FLAG >6kb
    H201 pADV-mCMV-EGFP-3xFLAG N/A EGFP mCMV 3FLAG >5kb
    H213 pADV-mCMV-3xFLAG-EGFP N/A EGFP mCMV 3FLAG >5kb
    H221 pADV-mCMV-3xFLAG-P2A-EGFP N/A EGFP mCMV 3FLAG >5kb
    H204 pADV-mCMV-mCherry-HA N/A mCherry mCMV HA >5kb
    H222 pADV-mCMV-3xFLAG-T2A-mCherry N/A mCherry mCMV 3FLAG >5kb
    H12588 pADV-EF1-mNeonGreen-CMV-MCS-3xFLAG N/A mNeonGreen CMV 3FLAG >4kb
    H12589 pADV-EF1-mScarlet-CMV-MCS-3xFLAG N/A mScarlet CMV 3FLAG >4kb
    circRNA过表达 H6946 pADV-CMV-S-circRNA N/A N/A CMV N/A >5kb
    miRNA过表达 H216 pADV-U6-miR30(miRNA)-CMV-EGFP N/A EGFP U6 N/A N/A
    表达cre K0024  pADV-CMV-Cre N/A N/A CMV N/A N/A
    滋扰 DKD001 pADV-U6-shRNA-CMV-EGFP N/A EGFP U6 N/A N/A
    DKD004 pADV-U6-shRNA-CMV-mCherry N/A mCherry U6 N/A N/A
    CRISPR敲除 H5064 pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-3xFLAG-spCas9 N/A N/A U6 3FLAG N/A
    H9350 pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9 N/A sfGFP U6 3FLAG N/A
    H5066 pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP N/A EGFP U6 N/A N/A
    H218 pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-spCas9 N/A mCherry CMV 3FLAG N/A
    H5449 pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-eSpCas9_1.1 N/A mCherry CMV 3FLAG N/A
      
     

    应用实例

      1.Hepatology. (IF=14.079). Zhou YF,et.al. (2018). Cystathionine β-synthase is required for body iron homeostasis. [腺病毒, 肝脏]
      
      熏染部位:肝脏
      
      载体名称:Ad-CBS
      
      注射方式:尾静脉
      
      注射量:1 x1011 PFU/mL,10ul
      
      检测时间:7天
      
      2. Diabetes. (IF=8.095). Xiao Y Z,et.al. (2015). Activation of ERK1/2 ameliorates liver steatosis in leptin receptor deficient (db/db)mice via stimulating ATG7-dependent autophagy. [腺病毒, 肝脏]
      
      熏染部位:肝脏
      
      载体名称:Ad-ATG7
      
      注射方式:尾静脉
      
      注射量:1 x10PFU /只
      
      检测时间:10天
      
      3. Molecular Neurobiology. (IF=5.397). Guo J,et.al. (2015). Overexpression of Fibulin-5 Attenuates Ischemia/Reperfusion Injury After Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats. [腺病毒, 大鼠]
      
      注射部位:大鼠大脑皮层
      
      载体名称:Ad-FBLN
      
      注射方式:脑立体定位注射
      
      注射量:三种差异剂量
      
      检测时间:7天
      
      MRCAT猫先生体育生物腺病毒的生产和质控接纳了国际学术界公认的尺度流程,接纳AdEasy及Admax腺病毒包装系统在HEK-293细胞中举行包装。所获得的病毒颗粒经由超速密度梯度离心和过滤,并通过壳卵白免疫法举行滴度测定。一banqing况下腺病毒的滴度在1010~1011pfu/ml,完全可以知足种种实验的使用要求。

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